Geração de clusters facilitada com o cBot da Illumina
O cBot da Illumina desempenha um papel central no fluxo de trabalho de sequenciação de nova geração, substituindo os métodos tradicionais e morosos por uma solução automatizada compacta e de elevado desempenho. O sistema cria clusters clonais a partir de modelos de ADN de cadeia simples utilizando a amplificação isotérmica em ponte diretamente numa célula de fluxo selada, evitando o manuseamento frequente e os riscos de contaminação associados aos métodos de PCR em emulsão.
O cBot permite a preparação de modelos de sequenciação a partir de mais de 96 amostras em apenas 4 a 5 horas, em comparação com as mais de 24 horas das técnicas mais antigas. O tempo de intervenção manual é inferior a 10 minutos, libertando tempo para outras actividades laboratoriais. O seu software intuitivo, combinado com um ecrã tátil de 8 polegadas, oferece navegação guiada passo a passo e monitorização do progresso em tempo real. Também é possível monitorizar e gerir vários cBots remotamente através de um browser ou smartphone, com notificações enviadas quando um ciclo termina ou é necessária uma intervenção.
O sistema utiliza reagentes TruSeq pré-embalados em placas de 96 poços, eliminando erros de preparação, requisitos de armazenamento complexos e potenciais fontes de contaminação. A integração de um coletor auto-perfurante e de ligações térmicas uniformes contribui para uma densidade de clusters óptima, sem necessidade de equipamento externo adicional. A geração de clusters resulta em mais de 200 milhões de agregados por célula de fluxo, cada um contendo cerca de 1.000 moléculas, prontos para sequenciação de alta precisão.
O processo baseia-se na imobilização do ADN numa superfície funcionalizada, seguida de amplificação clonal, bloqueio das extremidades 3' e hibridação do primer de sequenciação. Graças a esta metodologia rigorosa, o cBot garante uma produção eficiente, reprodutível e fiável de modelos de ADN para as plataformas de sequenciação Illumina.
